Análisis estructural y presencia de autofluorescencia en biopelículas formadas por micobacterias no pigmentadas de crecimiento rápido

Abstract

Las infecciones producidas por micobacterias no pigmentadas de crecimiento rápido (MNPCR) se han visto incrementadas en los últimos años, especialmente debido a la gran ubicuidad en la naturaleza de dichos microorganismos, a su alta resistencia a antibióticos y desinfectantes, al empleo de medicinas alternativas y a su capacidad de formar biopelículas. Pueden causar un amplio espectro de infecciones en humanos (infección del tracto respiratorio, de piel y tejidos blandos, o asociada a la presencia de cuerpos extraños). Entre los patógenos humanos habituales se encuentran M. abscessus, M. chelonae y M. fortuitum, los cuales están distribuidos ampliamente por todo el mundo y llegan a representar aproximadamente el 90 por ciento de las infecciones por micobacterias de crecimiento rápido. En el tratamiento de infecciones causadas por MNPCR se emplean preferentemente los macrólidos, las quinolonas y amicacina, aunque no existen estudios en relación con el uso de agentes antibiopelícula en biopelículas formadas por micobacterias. En este trabajo estudiamos la sensibilidad in vitro de siete especies tipo de MNPCR (M. abscessus, M. chelonae, M. fortuitum, M. mageritense, M. mucogenicum, M. peregrinum y M. smegmatis) frente a amicacina, ciprofloxacino y claritromicina en células planctónicas (CMI) y en biopelículas (CMEB), la sensibilidad in vitro frente agentes antibiopelícula (Tween 80 y NAC) solos y en combinación de antibióticos en células planctónicas (CMI) y en biopelículas (CMEB), y las características fenotípicas (velocidad de crecimiento, superficie cubierta, porcentaje de bacterias vivas,muertas y autofluorescencia) mediante microscopía confocal láser de barrido Leica DM IRB (CLSM) usando placas sin recubrimiento e hidrofóbicas de 2x4 pocillos y las tinciones fluorescentes Nile Red y Live Dead BackLight. Mediante CLSM detectamos la presencia de autofluorescencia azul en todas las cepas estudiadas (tanto dentro de las células micobacterianas como en la matriz extracelular), y visualizamos la presencia de cordones en algunas especies. Además, las micobacterias en biopelícula se hacen hasta 106 veces más resistentes que cuando están en estado planctónico. Al adicionar antibióticos, el espesor es el parámetro más afectado, y ciprofloxacino ha demostrado ser el antibiótico más activo frente a este tipo de biopelículas. Tween 80, a baja concentración y en combinación con antibióticos, es un potente agente antibiopelícula con resultados prometedores in vitro, lo que daría pie a desarrollar nuevas estrategias terapéuticas.