Valor de la técnica fish para la detección de translocaciones en linfomas no Hodgkinlinfoma folicular, linfoma de células del manto y linfoma B de células grandes

Abstract

En la última década la aparición de técnicas moleculares ha precisado el conocimiento de los LNH. El estudio de reordenamientos moleculares, tales como las translocaciones, ayuda en la clasificación de los LNH, incluso en algunos casos orientan su pronóstico. Disponer de herramientas y técnicas adecuadas para la detección de estas alteraciones va a ser fundamental en el conocimiento de los LNH. En nuestro estudio demostramos la superioridad de la técnica FISH frente a la PCR en la detección de translocaciones, obteniendo de un 20-30% más de translocaciones positivas por FISH, por tanto, es la técnica más adecuada para el estudio de los reordenamientos. La técnica FISH se encuentra completamente asentada en la rutina diagnóstica cuando el material de trabajo es tejido fresco, sin embargo, cuando los tejidos se encuentran incluidos en parafina presenta problemas técnicos (dificultades en la accesibilidad de la sonda, solapamiento de señales, ADN de más baja calidad). Este tipo de tejidos son imprescindibles en estudios retrospectivos. De aquí la necesidad de optimizar un protocolo adecuado que solvente estas dificultades y conseguir buenas señales de hibridación. Dos son los pasos que requieren una especial atención en la técnica de FIH para tejidos incluidos en parafina: la temperatura y los tiempos de digestión, de nuestra experiencia concluimos que las mejores señales de hibridación se obtienen con una temperatura de lavado de 99ºC durante 10 min y dejar digerir el tejido hasta que vemos una forma de helecho. Una vez estandarizada la técnica FISH se procedió al estudio de los reordenamientos que caracterizaban a 3 tipos de LNH: La t(14;18)(q32;q21) y el reordenamiento de BCL6 en 59 LF. La t(11;14)(q13;32) en 30 LCM. Los reordenamientos de BCL2, BCL6 y MYC en 64 LBCG. Valor de la Técnica FISH para la Detección de Translocaciones en Linfomas No-Hodgkin Los resultados son los descritos a continuación. La t(14;18)(q32;q21) nos permite caracterizar a el subgrupo de LF de grado I y II y a los LBCG que sufren transformación de los LF, mientras que en los linfomas de grado IIIa y IIIb la alteración más característica es la de BCL6. La t(14;18)(q32;q21) o el reordenamiento de BCL6 no van a ser los únicos mecanismos por los que se producen sobreexpresión de BCL2 o BCL6 en LF o LBCG, mientras que para la t(11;14)(q13;32), característica de LCM, existe un total paralelismo con la CCND1. Por último los reordenamientos de BCL2, BCL6, MYC no pueden ser usados como marcadores de supervivencia para los LBCG, aunque si permiten diferenciar subgrupos de LBCG.