Clonación y expresión de los genes "clt" de "Myxococcus xanthus" con capacidad coagulante de leche

Resumo

Myxcoccus xanthus es capaz de secretar gran cantidad de moléculas de interés industrial tales como antibióticos, carotenoides y enzimas hidrolíticos. Anteriores estudios indican que podrían existir de proteasas producidas por M.xanthus de distinta naturaleza bioquímica. Basándonos en trabajos que exponen la idea de que la mixobacteria podría ser una excelente fuente de proteasas de interés biotecnológico, en concreto, en la industria quesera, capaces de coagular la leche, se planteó, en primer lugar la caracterización de las proteasas producidas por 4 cepas diferentes de M.xanthus así como su posterior producción semi-industrial empleando una planta piloto de fermentación. Así, se describió que los sobrenadantes de los cultivos de las cepas de M.xanthus 422, DK1622, DX10407 y DZF1, muestran actividad coagulante sobre leche entera y desnatada, siendo la cepa de M.xanthus 422 la que mostró los valores de actividad más altos. La actividad máxima se observa en todas las cepas al final de la fase exponencial. Las condiciones óptimas para el crecimiento de las cuatro cepas y la producción de la proteasa coagulante fueron de 33ºC y 200 rpm, en el medio CTT. Además de la actividad coagulante, las cepas de M.xanthus 422, DK1622, DZF1 y DK10407 producen otras proteasas degradativas capaces de originar halos en placas de agarosa con caseína y de deshacer el coágulo lácteo. Esta actividad se detecta directamente en el sobrenadante de la cepa DZF1 o en los concentrados de los sobrenadantes del resto de las cepas. El factor de concentración máximo para la obtención de los concentrados de cuajo fue de 20 veces. Por encima de este valor, la actividad no aumenta y se favorece la acción de las proteasas degradativas que deshacen la cuajada. La cepa de M.xanthus 422 produce una proteasa coagulante de aproximadamente 40 kDa, con un pH óptimo de 6, una temperatura óptima de actuación de 37ºC y un punto isoeléctrico de 5.