Identificación de dianas génicas de e2f2 y análisis de su actividad transcripcional durante la quiescencia celular

Resumo

Los factores de transcripción E2F (E2F1-8) son reguladores clave de la proliferación celular, conocidos por inducir o reprimir la transcripción de numerosos genes involucrados en la replicación del DNA y la transición G1/S en las células de mamífero. Sin embargo, se desconocen las funciones específicas de cada E2F y la redundancia funcional que existe entre los diferentes miembros de la familia. Estudios genéticos llevados a cabo en nuestro grupo con ratones deficientes para E2F2, han demostrado que este gen es un regulador negativo de la expresión de sus genes diana durante la fase G0 del ciclo celular. Con el objetivo de conocer el mecanismo por el que E2F2 regula negativamente la expresión génica, se ha llevado a cabo un análisis genómico de la unión de E2F2 a los promotores de genes murinos (método ChIP-chip) en linfocitos T. Se ha demostrado que E2F2 se localiza sobre los promotores de numerosos genes implicados en la replicación/reparación del DNA y en la regulación del ciclo celular durante la quiescencia. La combinación de estos datos con el análisis de la expresión génica en células T quiescentes deficientes para E2F2 ha revelado que E2F2 cumple una función no redundante en la represión de estos genes diana durante la quiescencia celular, y por lo tanto en el mantenimiento de esta fase. Las regiones promotoras unidas por E2F2 han mostrado asimismo un enriquecimiento de los sitios de unión de la proteína CREB. Los experimentos de ChIP y los ensayos de luciferasa realizados han confirmado la unión de CREB a los genes diana de E2F2 en quiescencia, y han puesto en evidencia una posible interacción funcional entre estas dos proteínas. El resultado de esta interacción funcional sería la represión cooperativa de genes relacionados con el ciclo celular y, en consecuencia, el mantenimiento de la quiescencia.