Determinantes genéticos en función a la respuesta de la estimulación ovárica controlada

Resumen

ANTECEDENTES La reproducción, que permite la perpetuación de las especies, muestra un interés especial en los seres humanos al estar vinculada directamente al derecho de las personas a formar una familia. Desde este punto de vista, no sólo se trata de una cuestión individual, sino también social, al ser la familia el pilar principal de la estructura de la sociedad. Sin embargo, no siempre la reproducción humana es factible de forma natural. Existen factores, algunos desconocidos, que actúan negativamente sobre el proceso reproductor dificultando que algunas parejas puedan tener descendencia. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS) entre el 8% y 10% de las parejas en el mundo, van a sufrir problemas de infertilidad (Roupa et al. 2009). La Sociedad Española de Fertilidad (SEF) estima que cada año, el número de parejas aquejadas de infertilidad aumenta en unas 16.000. Diferentes factores podrían justificar estos valores tan altos. Junto a las causas internas (trastornos médicos, enfermedades producidas al nacer o a lo largo de la vida¿), los factores externos, como la forma de vida actual (alcohol, tabaco, alimentación, estilo de vida) y el retraso en la edad en que las parejas se plantean tener descendencia (Minaretzis et al. 1998) están influyendo muy negativamente en la fertilidad de las mismas, lo que genera malestar y no pocos problemas psicológicos en los individuos. Considerando este panorama socio-sanitario, este estudio planteó como primer objetivo general investigar algunas de las potenciales causas genéticas de infertilidad que, determinadas a priori, contribuyeran a pronosticar la subfertilidad en algunos individuos y, por tanto, permitieran buscar soluciones antes de que el problema se manifestara en las parejas. Cuando una pareja, después de intentar el embarazo de forma natural, se plantea someterse a un tratamiento de reproducción asistida, acude a un centro especializado donde poder determinar la causa de su esterilidad. Es entonces cuando el equipo de reproducción recomendará las mejores opciones de tratamiento, mediante la aplicación de las Técnicas de Reproducción Asistida (TRA) más adecuadas para cada caso concreto. Aunque la tasa de éxito de las TRA es elevada, 40-60%, hay ocasiones en las que se presentan problemas, como la baja respuesta o la hiperestimulación, de los que se desconocen las causas. Teniendo todo esto en cuenta, se planteó como segundo objetivo general de este estudio averiguar si los factores genéticos también podrían afectar negativamente a alguno de los procesos implicados en la reproducción asistida, en particular, la mala respuesta a la estimulación ovárica. Distintos autores han observado una gran variabilidad de respuesta ovárica a la estimulación con FSH en tratamientos de reproducción asistida. Para explicar esta variabilidad se ha propuesto la existencia de diferencias individuales en varios genes (FSHr) cuyos genotipos podrían ser responsables de los fenotipos de respuesta observados. El receptor de la FSH se genera en las células de la granulosa, que están recubriendo el folículo y van desarrollándose hasta que se forma el folículo preovulatorio, por tanto, es de interés conocer la influencia de los genotipos de FSHr en la formación y anclaje del FSHr en la membrana de estas células. Todos estos procesos de formación y desarrollo de los folículos hasta una correcta maduración del ovocito, se desarrollan con gran consumo de energía cuya producción se salda con elevados niveles de especies reactivas de oxígeno o lo que habitualmente denominamos radicales libres, que pueden perjudicar la formación del oocito y la posible fecundación del mismo. La energía, como se sabe, se genera mayoritariamente en las mitocondrias, en particular en el sistema de fosforilación oxidativa (OXPHOS) donde también se generan la mayor parte de las especies reactivas de oxígeno (ROS) celulares. Trece de las proteínas de este sistema OXPHOS, están codificados por el genoma mitocondrial que presenta polimorfismos específicos que determinan los haplogrupos mitocondriales característicos de las diferentes regiones geográficas. El hecho de que la biogénesis mitocondrial sea fundamental para la producción de energía y que esta se requiere para la maduración de los ovocitos y el desarrollo embrionario, sugiere que las variantes genéticas del mtDNA, es decir, los haplogrupos, podrían influir en la fertilidad femenina. Pero, además, en este contexto, es evidente que las enzimas que se encargan de contrarrestar los efectos de las ROS, podrían ser de gran importancia en la producción de los oocitos y, por tanto, en la fertilidad humana. Es por ello que se ha seleccionado para su estudio una de las enzima antioxidantes más potentes, la Paraoxonasa 1 (PON1). OBJETIVOS En resumen, este trabajo presenta como objetivo general investigar la posible influencia genética, tanto mitocondrial como nuclear, en la respuesta a la estimulación ovárica controlada (COS). Objetivos concretos: - Estudiar la influencia del fondo genético mitocondrial en la respuesta a la COS: se utilizarán técnicas de PCR Real-Time y secuenciación, para determinar los haplogrupos mitocondriales de las pacientes, así como la valoración del daño oxidativo y la dosis genómica en las células de la granulosa. - Estudiar la influencia de dos genes nucleares en la respuesta a la COS: ¿ Gen del receptor de FSH (FSHr), como potencial factor importante en la respuesta a la estimulación ovárica controlada en el ser humano. Se determinarán los genotipos de dos de sus polimorfismos (Ser680Ala y Ala307Thr) mediante RFLP¿s y su respuesta a estimulación ovárica. ¿ Determinación de la expresión del receptor de FSH en la membrana de las células de la granulosa, mediante técnicas de inmunofluorescencia y posterior análisis en microscopio confocal. Se valorará la relación entre la cuantificación del receptor en la membrana de las células y su posible relación con los genotipos FSHr. ¿ Gen de la Paraoxonasa (PON1) y su posible relación con el daño oxidativo y la aparición de endometriosis. Se determinarán los genotipos de dos de sus polimorfismos (PON1L55M y PON1Q192R) mediante RFLP¿s así como los de su promotor.